他们一同在日本留学，共同翻译《域外集》，在文学探索之路上携手前行。
归国后，二人又共同参与运动，成为并肩作战的战友。
周作人在文学理论建设方面的诸多观点，都曾得到鲁迅的支持与鼓励，而鲁迅的文学创作，也为二弟周作人提供了许多启发，兄弟俩在文学事业上相互促进，共同为新文学的发展奠定基础。
不过在1923年 7月 14日，鲁迅日记中突然记载“是夜始改在自室吃饭，自具一肴，此可记也”。
之后在 7月 19日，周作人亲自送一封信给鲁迅，信中写着：
“以后请不要再到后边院子里来，没有别的话。愿你安心，自重”。
至此，宣告兄弟关系正式破裂。
关于决裂原因，说法众多。
有人相传认为是两人家庭琐事与经济纠纷导致，鲁迅因为很赚钱，承担着大家庭的经济重担，而周作人及其日本妻子羽太信子生活铺张，致使家庭经济出现矛盾。
也有传言认为单纯与羽太信子这个日本女人从中挑拨有关，羽太信子掌控家庭财政，还对鲁迅诸多不满，在兄弟间制造矛盾。
此外，还有文化观念与政治立场差异等因素的说法，但到后世也无定论。
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