将抗大总校华中派遣大队与抗大4分校合并，并确定豫皖苏边区保安司令部改辖3个独立团，担任坚持、巩固根据地的任务。
此时，豫皖苏抗日根据地东起津浦铁路，西至新黄河，南跨涡河，北达陇海铁路的广大地区，面积为1万多平方公里，人口约300万。
到1940年底，豫皖苏边区党委下辖淮上、涡浍、陇海路南、豫皖和睢（县）杞（县）太（康）5个地委，2个专署、5个县政府和6个办事处。
6月1日，第6支队于新兴集召开“五卅”纪念大会。日寇1000余人趁机分数路袭击我军，纪念大会的会场变成了杀敌报国的战场。我军参加大会的各部队，分数路与日寇激战于新兴集附近周围，打得敌人首尾难顾，不得不于黄昏败退。
6月3日，我军在新兴集附近的鸭子刘家，继续召开了“五卅”纪念大会，表达了我军誓雪国耻的坚强意志。
“六一”战斗后不久，萧县成立了“萧县抗敌纵队”，各县均成立了自卫团司令部。与此同时，又成立了“豫皖苏边区保安司令部”，作为地方武装的统一领导机关，以便加强地方武装建设。
1940年8月，桂系白军、骑8师马彪部4个师的兵力，在4纵队开辟淮上根据地之际，对我军形成三面包围的态势。
骑2军何柱国对我军态度亦趋恶化，皖北磨擦有一触即发之势。第4纵队利用国民党第一战区和第五战区的矛盾，采取区别对待的策略，开展统一战线工作，并对顽方作了某些让步，同时也作了自卫还击的准备，使局势暂时得到了缓和。
11月中旬，蚌埠、宿县等地的敌伪五千余人，附坦克二十余辆，进犯蒙城、涡阳，为粉碎敌伪的“扫荡”，第5旅和特务团在蒙城以北的板桥与敌人发生战斗，激战三昼夜，毙伤敌伪千余人，击毁汽车、坦克十余辆，击落飞机一架，严重地打击了敌人。第4纵队在与敌伪顽的斗争中，以军事打击和政治分化等手段，巩固和扩大了豫皖苏根据地。
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